十六烷基二甲基苄基氯化铵通常通过苄氯和十六烷基二甲基叔胺的亲核取代反应来制备。具体步骤包括在干燥的反应烧瓶中将苄氯溶解于乙酸乙酯中，然后将十六烷基二甲基叔胺缓慢加入到反应混合物中，室温下剧烈搅拌反应过夜， 在真空下浓缩得到目标产物。